Os colágenos são proteínas da matriz extracelular de extrema importância na estrutura e regeneração dos tecidos. Estão presentes em praticamente todos os tecidos representado entre 25% a 35% das proteínas encontradas no corpo dos mamíferos.

Sua presença ou ausência em determinados tecidos representa estados metabólicos distintos o que confere a eles um papel morfológico importante na caracterização de algumas patologias. São subdivididos em 11 tipos, cada um com funções distintas.

O PSR (Picrossirius Red) é uma técnica histoquímica bastante empregada na detecção de colágenos em tecidos. Tecidos corados com PSR podem ser observados em microscopia de campo claro, de polarização ou em microscopia confocal.

A observação em microscopia de polarização é particularmente interessante para a análise computacional de imagens. Por esta técnica, o colágeno se destaca do restante do tecido assumindo uma coloração brilhante. A polarização facilita a segmentação de cores para a quantificação.

Embora as variações de cor na imagem polarizada sugiram a presença de mais de um tipo de colágeno, não é seguro afirmarmos a proporção de colágenos presentes em um campo por esta técnica. Usa-se a imuno-histoquimica ou imuno-fluorescência para esta finalidade.

Os pressupostos descritos no artigo Quantificação de Imuno-histoquímica se aplicam a este tipo de análise. Acrescenta-se a estes, a polarização racional dos campos. As imagens polarizadas são obtidas pela rotação do polarizador. O fundo claro e as estruturas não coradas pelo PSR ficam escuras na medida que este é girado. Em contrapartida, o colágeno presente vai ficando mais brilhante. Desta forma o grau de alinhamento entre o polarizador e o analisador pode influenciar na revelação do colágeno observado no campo. Na prática, giramos o polarizador até que o fundo fique completamente escuro. Se continuamos girando o fundo volta a clarear, então retornamos o giro no sentido contrário até que o fundo se mostre o mais escuro possível.

Os passos seguintes para esta análise são semelhantes aos usados na análise da imuno-histoquimica, a saber:

1 – abro uma imagem contida em um diretório.

2 – faço uma segmentação de cores por amostragem, contrastando o que é marcação do que não é marcação. Devemos escolher uma cor de segmentação diferente do vermelho ou amarelo, para que possamos reconhecer o que está sendo incluído.

3 – quantifico a área ocupada por marcação em relação à área total da imagem.

4 – salvo os resultados em uma planilha eletrônica, para posterior formatação e análise estatística.

Protótipo de quantificação de colágeno em microscopia de polarização com o uso do Image Pro Plus (Media Cybernetics)